琼脂糖凝胶及反应液DNA回收试剂盒

MOBIO的 UltraClean® 15 DNA Purification Kit为10-15分钟快速DNA回收试剂盒。可从TAE和TBE琼脂凝胶、溶液及酶反应液中回收DNA。回收片段大小范围为60bp-50kb的DNA。

UltraClean®15 DNA Purification Kit选用了经济的硅胶吸附法从琼脂凝胶中回收DNA。电泳后，从凝胶中切取目标DNA条带，在高离液序列盐溶液环境下溶解。DNA在ULTRA SALT存在的情况下选择性地吸附到ULTRA BIND溶液的硅胶中。沉淀经过冲洗用纯水后重悬得到终DNA。此时DNA可直接用于下游实验。

保持一致的回收率

l 只用枪头轻轻上下吹打来重悬吸附了DNA的硅胶沉淀，而不用涡旋振荡。

l DNA绑定和洗脱步骤要充分混匀。DNA绑定步骤期间若ULTRA BIND硅胶一致处于悬浮状态会大大提高绑定效率，不要让硅胶沉淀下来。

跑电泳条件建议

我们推荐TAE凝胶电泳pH7.5-7.8，TBE凝胶则pH8.0-8.3。4%的琼脂糖凝胶都能适用于本试剂盒。也可以使用任何品牌和琼脂糖类型。无需特别使用低熔点琼脂也能获得很好的回收率。

若ULTRA BIND干掉了

每次用完以后没盖好盖子常会导致ULTRA BIND干掉了。干掉的ULTRA BIND可重新水合不影响绑定效果。根据30s离心后固体物质的体积，加入去离子水至终形成50%液体，50%固体的状态。小心清理瓶盖和密封环。充分涡旋混匀即可继续使用。

若ULTRA SALT发黄

盐溶液开始氧化了。溶液的原始pH值未改变前度是不会影响使用效果的。测pH值：确保玻璃电极不会受到高浓度盐的影响，否则就改用pH试纸。的pH值范围是6.9-7.4。超过此范围，用10%冰醋酸调整。此动作会稍微影响盐溶液的稳定性，但能保证DNA获得很好的回收得率。旋紧瓶盖或4℃保存都能避免氧化发黄或延缓氧化过程。

低回收得率

通常低回收得率是有绑定不好造成的。pH是影响硅胶吸附DNA效率的关键因素。的DNA绑定条件是pH6.9-7.4。ULTRA SALT的pH缓冲能力不能满足凝胶的缓冲液，你可以用10%冰醋酸把凝胶调整到pH7.0-7.2。需要升pH则用0.1N NaOH。然后根据步骤6的指示添加ULTRA BIND。如果你的pH检测仪对高盐敏感，请改用pH检测试纸。

增加回收得率

l 绑定步骤充分混匀

l 只用枪头上下轻轻吹打重悬ULTRA BIND硅胶，不要涡旋

l 绑定过程中监测pH。取少量DNA/ULTRA SALT点上pH试纸即可。合适的pH值应为6.9-7.4.。ULTRA MELT也可以每次少量添加并混匀来降低pH值。当pH趋于合适，DNA的吸附绑定才能正常进行。

l 尽可能不要低于55℃溶胶。

文献

·         Kazuya Ishikawa, Kensaku Maejima, Ken Komatsu, Yugo Kitazawa, Masayoshi Hashimoto, Daisuke Takata, Yasuyuki Yamaji, and Shigetou Namba. Identification and characterization of two novel genomic RNA segments of fig mosaic virus, RNA5 and RNA6. J. Gen. Virol., Jul 2012; 93: 1612 - 1619.

·         Saar, I., Poldmaa, K., and Koljalg, U. The Phylogeny and Taxonomy of Genera Cystoderma and Cystodermella (Agaricales) based on Nuclear ITS and LSU Sequences . Mycological Pregress. 8(1): 59-73 (2009).

·         Vukovi, J., Ruitenberg, M.J., Roet, K., Fransse, E., Arulpragasam, A., Sasaki, T., Verhaagen, J., Harvey A.R., Busfield, S.J., and Plant, G.W. The Glycoprotein Fibulin-3 Regulates Morphology and Motility of Olfactory Ensheathing Cells In Vitro. Glia. 57(4): 424-443 (2009).