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伏马菌毒素
快速检测试剂
RIDASCREEN® FAST Fumonisin
酶联免疫分析快速定量测定伏马菌毒素试剂盒 (产品编号：R5602) 德国R-Biopharm制造 (中文翻译件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准)。
该试剂盒已经经过美国USDA/GIPSA认证。
1. 用途
RIDASCREEN® FAST Fumonisin采用竞争性的酶免疫分析法定量分析谷物及饲料中的伏马菌毒素。试剂盒中含有酶免疫分析法所用的所有的试剂。试剂盒可以进行48个试验，包括标准。定量分析要求使用酶标板读数仪。
2. 概要
伏马菌毒素是由念珠球菌镰刀菌素属产生的，玉米中最容易产生这种毒素，它对许多动物有不力影响，不同的浓度将会产生各种不同中毒反应，当马饲料中浓度在5-10mg/kg会引起神经中毒症状，猪每日按体重摄食4-16mg/kg伏马菌毒素会导致肝硬化，超过16mg/kg会导致肺水肿，鸡对毒素的反应可以达到75mg/kg，牛似乎对高浓度的伏马菌毒素也不会有反应，使用RIDASCREEN® Fumonisin EXPRESS检测谷物及饲料中的伏马菌毒素非常必要也非常简单。
3．测定原理
测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对兔IgG的羊抗体。加入伏马菌毒素抗体，酶标记物，标准或样品溶液。游离伏马菌毒素与酶标记物竞争伏马菌毒素抗体，同时伏马菌毒素抗体与羊抗体连接。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色产生变化。在450nm处测量，吸收光强度与样品中的浓度成反比。
4. 提供的试剂
每一个盒中的试剂足够进行43个测量（附加5个标准分析孔），盒中的材料如下：
1 X 32孔板（6条 X 8孔，可以拆分为单孔）包被有羊抗体
3 X 标准液, 1.3ml/瓶, 为伏马菌毒素标准溶液
标准液浓度为：0ppm; 0.222ppm; 0.666ppm; 2ppm; 6ppm 。
1 X 伏马菌毒素抗体溶液（3ml）兔单克隆，直接使用，黑色帽
1 X 酶标记的伏马菌毒素，直接应用液(3ml) 红色帽
1 X 基质/发色剂(6ml) 白色滴瓶
1 X 反应停止液1M硫酸（6ml） 黄色滴瓶
样品浓度可以直接从标准曲线中读出，已经考虑了样品制备过程霉菌的稀释倍数为70。
5. 需要的材料但盒中不提供
----5.1设备
----微孔板酶标仪(450nm)定量分析用
----振荡器
----粉碎机
----50ul, 100ul, 1000ul微量加样器
----250ml量筒
----300ml 漏斗及容量瓶
----WhatmanＮｏ１或相当的滤纸
5.2 试剂
----甲醇，７０％甲醇溶液，
----蒸馏或去离子水。
6. 操作者应该注意之事项
----标准液含有伏马菌毒素，应特别小心
----使用过的玻璃容器及伏马菌毒素溶液用pH7的高
氯酸溶液（10%V/V）浸泡过夜
----反应停止液为1M硫酸,避免接触皮肤
----不要使用过了有效日期的试剂盒, 稀释或搀杂使用会引起
灵敏度的降低.
----不要交换使用不同批号的盒中试剂.
7. 储存条件
----保存试剂盒于2-80C.不要冷冻
----无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下
----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂
一起重新密封.
8. 试剂变质的迹象
红色的基质/发色试剂产生蓝颜色,表明基质/发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.6个单位 (A450nm<0.6)时,表示试剂可能变质
9. 样品处理 (样品应当在暗处及冷藏保存)
----粉碎5g有代表性的样品与25ml甲醇70%溶液混合
----振荡3分钟
----用Whatman滤纸过滤
--- 1份滤液用13份双蒸流水或去离子水稀释（例如：100ul提取液+1.3ml蒸馏水）
----取50ul稀释液进行分析
*根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加（USDA/GIPSA检测称取样品50g+250ml甲醇）。
10. 酶标免疫分析程序
10.1测定之前注意事项
1. 使用之前将所有试剂回升至室温.(20-25oC)
2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8 oC.
3. 在使用中不要让微孔干燥
4. 在EIA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点.
5. 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖子盖住微孔板.
10．２ 包被有抗体的微孔板条
锡箔袋沿横向压皱外边打开.取出需用数量的微孔板及框架, 将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封, 保存于2-80C.不要冷冻.
10.3标准液
伏马菌毒素标准液为直接应用液，已经考虑了样品制备的70倍稀释，因此样品中的伏马菌毒素的浓度可以直接从标准曲线读出。
10.4测定程序,在18-24 oC条件下操作
1. 根据样品量将足够数量的孔条插入微孔架，记录样品及标准位置。
2. 加入50ul的标准或处理好的样品到各自的微孔中，每个标准和样品必须使用新的吸头。
3. 加入50ul酶标记物到微孔底部, （红色盖）。（注意移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染。）
4. 加入50ul抗体溶液（黑色盖）到每一个微孔底部，充分混合，在室温（18-30°C）孵育10分钟（+/-1）。（注意此操作步骤要快，尽量保持前后孔孵育时间的一致，如果实验所用孔数量多，请用多通道移液器。移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体。）
5. 倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体.用洗瓶或多通道移液器将250ul蒸馏水加入孔中。再次倒出孔中的液体,完全除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤两次以上。（移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免污染洗涤液造成洗板不彻底。洗板后要立即进行下一步操作，避免板孔干躁造成重复性差）
6．加入 2滴（或100ul）基质/发色试剂（白色滴瓶）到微孔
中, 充分混合并在室温 暗处孵育5（+/-0.5）分钟（注意此操作步骤要快，尽量保持前后孔孵育时间的一致，使用多通道移液器加液，移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体。
7． 加入 2滴（或100ul）反应停止液（黄色滴瓶）到微孔中混合好, （注意此操作步骤要快，如果实验所用孔数量多，请将所需数量的滴瓶中液体转移至V型试剂槽中，并用多通道移液器加液。）在450nm处测量吸光度值以空气为空白，必须在加入停止液后30分钟内读取光度值
11. 结果
定量分析：所获得的标准和样品吸光度值除以个标准(0标准)的吸光度值再乘以100.因此0标准等于并且以百分比给出吸光度值。
标准的吸光度值(或样品)
----------------------------------x 100= %吸光度值
0标准的吸光度值
计算的标准值绘成为一个对应伏马菌毒素浓度(mg/kg)的半对数坐标系统曲线图, 相对应每一个样品的浓度(mg/kg)可以从标准曲线上读出.
RIDASCREEN FAST Fumonisin标准曲线见英文原版说明书
仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于（吸光度高）还是大于（吸光度低）标准值。
目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于（颜色深）还是大于（颜色浅）标准值。特别注意如果选择0.222ppm 或0.666ppm的标准，请在步骤6中将在室温暗处孵育5分钟更改为2-3分钟。
12．灵敏度
定量检测下限为0.222mg/kg（0.222ppm）。
r-Biopharm拜发公司, r-Biopharm Rhone LTD拜发罗恩公司
各种霉菌毒素检测试剂盒及免疫亲和柱
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AFLACARD B1黄曲霉毒素B1 快速检测卡 检测限可调整为2,5,10,15,20ppb
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AFLACARD TOTAL总黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2)快速检测
卡 检测限可调整为4,5,10,15,20,30ppb
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Kobra Cell黄曲霉毒素B1,G1, 分析仪4秒钟得到结果
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AFLAPLATE B1黄曲霉毒素B1 ELISA 试剂盒 单克隆抗体(1.5-50ppb)
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AFLASCAN黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2), 单克隆抗体免疫亲和柱,半定量目测
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AFLAPREP单克隆抗体免疫亲和柱，用于检测黄曲霉毒素的样品纯化,窄范围0-200ppb,检测限小于0.5ppb
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EASI-EXTRACT AFLATOXIN单克隆抗体免疫亲和柱，用于检测总黄曲霉毒素的样品纯化
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总黄曲霉毒素单克隆抗体免疫亲和柱，用于检测黄曲霉毒素的样品纯化
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总黄曲霉毒素（Ｂ１,Ｂ２,Ｇ１,Ｇ２,Ｍ１,Ｍ２）单克隆抗体ELISA方法
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黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2) 快速检测 (15分钟) 定量分析, ELISA方法
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黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2) 特快速检测 (5分钟) 半定量分析, ELISA方法
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黄曲霉毒素B1 高灵敏度，检测限为0.625ppb, ELISA方法
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AFLAPREP M单克隆抗体免疫亲和柱，用于检测乳品中黄曲霉毒素M1的样品纯化,检测限小于5ppt
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乳制品中的黄曲霉毒素 M1 (高灵敏度), ELISA方法
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乳制品中的黄曲霉毒素M1快速检测(15分钟), ELISA 方法
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T - 2 毒素 (高灵敏度), 单克隆抗体ELISA方法
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FUMONIPREP伏马菌毒素单克隆抗体免疫亲和柱，用于检测伏马菌毒素的样品纯化,范围100ppb-15000ppb
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FUMONIPLATE伏马菌毒素, ELISA方法, 单克隆抗体
(0. 3-10ppm)
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伏马菌毒素(高灵敏度), ELISA方法
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伏马菌毒素快速检测(15分钟), ELISA方法
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赭曲霉毒素A (高灵敏度), ELISA方法
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赭曲霉毒素A 快速检测(15分钟),单克隆抗体ELISA方法
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赭曲霉毒素A单克隆抗体免疫亲和柱，用于检测赭曲霉毒素 A 的样品纯化
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OCHRAPREP单克隆抗体免疫亲和柱，用于检测赭曲霉毒素 A 的样品纯化, 检测范围1-1000ppb, 检测限小于1ppb
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OCHRASCAN 免疫亲和柱,半定量目测,检测限2ppb
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玉米赤霉烯酮 (高灵敏度), ELISA方法
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玉米赤霉烯酮快速检测(15分钟),单克隆抗体ELISA方法
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EASI-EXTRACT ZEARALENONE玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，用于检测玉米赤霉烯酮样品纯化
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (高灵敏度), 单克隆抗体ELISA方法
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 (15分钟), ELISA方法
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇特快速检测 (5分钟) 半定量分析, ELISA方法
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红曲霉染色剂中的桔霉毒素快速检测(15分钟), ELISA方法
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![[禽病检测]禽病抗原检测 ALV](http://file1.foodmate.net/file/upload/201710/26/11054270727442.jpg.thumb.jpg)
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