大肠杆菌测试片

大肠杆菌（荧光法）测试片说明书

一、原理

本测试片含有干粉培养基、选择性抑制剂、荧光底物和冷水可溶性凝胶。培养基提供大肠杆菌生长所需营养；选择性抑制剂可有效抑制其它细菌的生长；当有大肠杆菌生长繁殖，荧光底物被分解，游离出荧光基团，365nm紫外灯下菌落呈蓝白色荧光。

二、包装规格

25片/包；20包/箱。

三、样品检验

1.样品制备

按常规方法制备样品稀释液（推荐稀释液为无菌生理盐水，不可使用磷酸盐缓冲液、含亚硫酸钠稀释液和其它含糖稀释液），根据样品中大肠杆菌数量推测选择2-3个连续稀释度备用。

2.接种

将测试片置于水平台面，揭开上层薄膜，吸1mL样品稀释液滴加于培养层，缓慢盖上上层薄膜，将匀液板有凹槽部分对准样品稀释液区域轻放于上层薄膜上，手指用力按压匀液板使稀释液于压环内均匀扩散。每个稀释度2个重复。

3.培养

接种后的测试片叠放（不多于15片）于自封口袋中（不封口），36℃±1℃培养。根据样品中大肠杆菌活性，8h-12h可对样品中大肠杆菌进行预判，16h-24h可进行准确计数。测试片放于平整处培养（可在培养箱中放一小块纸板），不可直接放于铁丝架上培养，容易使凝胶挤压变形。

4.计数

培养结束后取出测试片，暗室中365nm紫外灯下观察，有蓝白色荧光的为大肠杆菌（菌落为蓝白色圆点，周围有浅蓝白色荧光，可与其他荧光干扰物区分开），选择大肠杆菌数为10cfu/片-100cfu/片的测试片进行计数。废弃物需经121℃高压灭菌20分钟后处理。

四、测试片在大肠杆菌鉴定中的应用

本测试片可对常规检测中产气的LST、BGLB、EMB及其它大肠杆菌检测的中间环节进行挑菌鉴定。

1.水化测试片

将测试片置于水平台面，揭开上层薄膜，吸1mL稀释液滴加于培养层，缓慢盖上上层薄膜，将匀液板有凹槽部分对准稀释液区域轻放于上层薄膜上，手指用力按压匀液板使稀释液于压环内均匀扩散，凝固20分钟备用。

2.接种

将水化后测试片置于水平台面，揭开上层薄膜，接种针挑取待检菌点种于测试片上，盖上上层薄膜。

3.培养

接种后的测试片叠放（不多于15片）于自封口袋中（不封口），36℃±1℃培养8h。测试片放于平整处培养（可在培养箱中放一小块纸板），不可直接放于铁丝架上培养，容易使凝胶挤压变形。

4.结果判读

培养结束后取出测试片，暗室中365nm紫外灯下观察，有蓝白色荧光的为大肠杆菌阳性（菌落为蓝白色圆点，周围有浅蓝白色荧光，可与其他荧光干扰物区分开）。废弃物需经121℃高压灭菌20分钟后处理。

五、储存：

阴凉避光处保存，保质期1年；开封后放于自封口袋中于室温保存，并于1个月内用完。

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