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【细胞货号】 C0123
"选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做和氧化方面的，而这种培养基中含有剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含剂的培养基。
瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后，将血清放入，待温度升高到56℃后计时，一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清包括不同批次对细胞的影响。【细胞缩写】" bEnd.3细胞
【细胞名称】 bEnd.3(小鼠脑微血管内皮细胞)
【背景资料】 见细胞说明书
【细胞来源】 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系
【代次】 P4
【规格】 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
"细胞冻存及复苏基本知识普及：
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，bEnd.3小鼠脑微血管内皮传代细胞起到了细胞保种的作用。
除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜DMSO，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。
采用""慢冻快融""的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内-196℃。【细胞数】" 1*10（6）
【生物安全级别】 1
【生物体】 小鼠
【组织来源】 脑微血管
【细胞形态】 上皮细胞样
【细胞特性】 贴壁
【细胞活力】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
【细胞检测】 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
"细胞常规培养传代流程请严格遵照无菌操作
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞注意把握消化时间，通常控制在1-2min
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时不建议消化到细胞漂浮去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液每周2-3次，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养
1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时
2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养
3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。【培养条件】" 详见细胞说明书
【传代方法】 建议1:2-1:3 两天换液一次
【冻存条件】 详见细胞说明书
【主要文献】 请具体查阅相关发表文章
细胞接收后的操作流程与注意事项：
1、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决
2、贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（不能超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养
3、生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，bEnd.3小鼠脑微血管内皮传代细胞成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养
细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）
2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养
3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室C7103 HDQ-P1人乳腺癌贴壁细胞系 ，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！
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