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SILAC（stable isotope labeling with amino acid in cell culture）即细胞培养条件下稳定同位素标记技术。细胞用含有轻、中、重型同位素的必需氨基酸培养基培养，经过6代以上的培养，细胞内的蛋白被稳定同位素完全标记。收获细胞样品，裂解不同标记的细胞，提取蛋白并等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定。质谱仪可检测到成对出现的肽段信号峰，通过软件比对得到蛋白质的定性信息和相对定量信息。
技术应用
适用于可传代培养的动物细胞样本；
技术优势
1、 体内标记，更接近于样品真实状况
2、 灵敏度高，样本需求量少
3、 高通量，可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质
4、 定量用的线性范围广
5、 采用高分辨率质谱定量，定量结果准确，重复性好
服务内容
1、细胞同位素标记 5、二维液相分离和质谱鉴定
2、蛋白提取与定量 6、数据库检索
3、标记测试 7、蛋白质定量分析
服务须知
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服务项目 |
客户提供 |
交付产物 |
实验周期 |
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SILAC |
1、可用SILAC培养基培养的细胞 2、或者已经标记完全的细胞 |
1、质谱检索原始excel表格 4、差异蛋白的生物信息学分析结果 5、实验报告，包括实验步骤、使用仪器、软件检索参数等 |
除细胞培养外1.5-2个月 |
结果示例
成功服务案例
【研究目标】
猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）是猪圆环病毒病（PCVD）的主要病原物，PCVD可以造成猪体重减轻、呼吸道和消化道紊乱、淋巴结肿大、淋巴细胞衰竭、肺炎、肠炎、血管炎、缺血性病变、繁殖障碍、坏死性皮炎，最终造成10-30%的猪个体死亡，给农户造成重大损失。然而，PCV2感染PK-15细胞后的致病机制仍然未知，用SILAC技术对猪细胞感染PCV2前后的蛋白进行差异分析，期望能得到与PCV2致病机理有关的信息。
【实验流程】
1、轻、重型同位素培养基分别标记2组PK-15细胞；
2、一组PK-15细胞作为对照，一组PK-15细胞用PCV2病毒感染；
3、验证PCV2病毒是否成功感染了PK-15；
4、做标记测试确保标记物完全标记了蛋白；
5、分别提取感染组与对照组PK-15细胞的蛋白质，并定量；
6、胰酶酶切蛋白质为肽段；
7、HPLC分离肽段，并进入LTQ-Orbitrap质谱仪进行分析；
8、质谱数据进行蛋白质搜索、鉴定和定量分析，找到差异蛋白；
9、差异蛋白质进行生物信息分析。
10、采用Western blot验证两组细胞内的蛋白含量差异。
【实验结果】
PK-15细胞被PCV2感染前后具有显著表达差异的蛋白质一共有163种。通过GO分析得到这些差异表达蛋白在细胞内的定位，IPA分析显示这些蛋白质参与了底物运输、细胞骨架变化和应激反应过程。
【参考文献】
Fan, H. et al. Quantitative proteomics using stable isotope labeling with amino acids in cell culture reveals protein and pathway regulation in porcine circovirus type 2 infected PK-15 cells. J Proteome Res 11, 995-1008 (2012).
【研究目标】
猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）是猪圆环病毒病（PCVD）的主要病原物，PCVD可以造成猪体重减轻、呼吸道和消化道紊乱、淋巴结肿大、淋巴细胞衰竭、肺炎、肠炎、血管炎、缺血性病变、繁殖障碍、坏死性皮炎，最终造成10-30%的猪个体死亡，给农户造成重大损失。然而，PCV2感染PK-15细胞后的致病机制仍然未知，用SILAC技术对猪细胞感染PCV2前后的蛋白进行差异分析，期望能得到与PCV2致病机理有关的信息。
【实验流程】
1、轻、重型同位素培养基分别标记2组PK-15细胞；
2、一组PK-15细胞作为对照，一组PK-15细胞用PCV2病毒感染；
3、验证PCV2病毒是否成功感染了PK-15；
4、做标记测试确保标记物完全标记了蛋白；
5、分别提取感染组与对照组PK-15细胞的蛋白质，并定量；
6、胰酶酶切蛋白质为肽段；
7、HPLC分离肽段，并进入LTQ-Orbitrap质谱仪进行分析；
8、质谱数据进行蛋白质搜索、鉴定和定量分析，找到差异蛋白；
9、差异蛋白质进行生物信息分析。
10、采用Western blot验证两组细胞内的蛋白含量差异。
【实验结果】
PK-15细胞被PCV2感染前后具有显著表达差异的蛋白质一共有163种。通过GO分析得到这些差异表达蛋白在细胞内的定位，IPA分析显示这些蛋白质参与了底物运输、细胞骨架变化和应激反应过程。
【参考文献】
Fan, H. et al. Quantitative proteomics using stable isotope labeling with amino acids in cell culture reveals protein and pathway regulation in porcine circovirus type 2 infected PK-15 cells. J Proteome Res 11, 995-1008 (2012).
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