法之一BCA法研制而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。
灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。
在50-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%
的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于0.01%。
保存条件:
室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存。
注意事项:
需酶标仪一台,测定波长为540-595nm之间,562nm。需96孔板。如果没有酶标仪,也可以使用
普通的分光光度计测定,但测定时,需根据比色皿的检测体积,适当加大BCA工作液的用量使不小于检测体积,样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。