鼠病病毒逆转录酶，现货

逆转录酶 M-MLV Reverse Transcriptase(RNase H^-)

产品简介

莫洛尼氏鼠病毒逆转录酶（M-MLV RT）能以单链RNA或DNA为模板，在引物的引发下合成与模板互补的DNA链。本逆转录酶是通过基因重组技术克隆表达的缺失突变型RNase H-的M-MLV反转录酶，RNase H活性缺失，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。

来源

重组蛋白质（E.coli）；纯度>95%，没有检测到其他蛋白酶和核酸酶活力。

活力单位定义

以Poly (A)为模板，Oligo (dT)为引物，在37℃条件下，10分钟内催化掺入1 nmol dTTP所需酶量定义为1个活性单位(U)。

应用

用于 lst-Strand cDNA 的合成， RT-PCR 反应以及 Real Time RT-PCR 反应等。

储存条件

冰袋运输；长期保存-20℃或以下（12个月）； 避免反复冻融，建议分装保存5× M-MLV RT Buffer。

溶液成分

使用示例

1. 在微量离心管中，配制下列模板RNA/引物混合液：

   Template RNA	Total RNA	1ng-5μg
   	poly(A) RNA	10pg-500ng
   Primer	Oligo(dT)18 Primer	0.5μg(100pmol)
   	Random Primers	0.2μg(100pmol)
   	Specific Primer	10-20pmol
   DEPC-treated water		Up to 12.5μl

2. 65℃保温5分钟后迅速在冰上冷却2分钟；
3. 短暂离心后，加入以下组分：

   5X M-MLV RT Buffer	4μl
   dNTP(10mM)	2μl
   M-MLV RT (RNase H-)(200U/μL)	1μl
   RNase Inhibitor	0.5μl
   Total volume	20μl

4. 42℃孵育1小时；
   以Random Primers作为反转录引物时应先于25℃，反应10分钟，然后再于42℃条件孵育1小时。
5. 70℃加热15分钟以终止反应。得到cDNA溶液可直接用于2nd-Strand cDNA的合成或PCR扩增。