一、样本处理
1.组织样本用剪刀剪碎(越碎越好,成糊状);或者碾磨;
2.如果是含有杂质的组织(如盐、油、调料等),建议剪碎后,用灭 菌水清洗,然后弃上清。
二、操作步骤
1.将30 mg组织置于1.5 ml离心管中,加入200 ul 溶液A和200溶液B,震荡混匀;加入20 ul蛋白酶K,震荡混匀;
2. 56℃水浴消化2-3 h,期间颠倒离心管,以;
3.水浴后,加入200 ul无水乙醇,颠倒混匀,5000 rpm/min离心1min;取上清加入过滤柱中,10000 rpm,离心1min;
4.倒掉管中废液,往离心柱中加入溶液WB1 600 ul,10000 rpm/min,离心1min;
5.倒掉废液,往离心柱中加入溶液WB2 600 ul,10000 rpm/min,离心1min;
6.倒掉废液,10000 rpm/min,离心2 min;
7.将过滤柱放置一个新的1.5 ml离心管中,开盖静置5min;
8.往离心柱中加入50-100 ul EB洗脱缓冲液(在65-70℃水浴预热,根据需要的DNA浓度选择加入洗脱液的量,少50 ul), 静置3-5 min;
9.12000 rpm/min,离心1min,收集DNA。