滑膜成纤维细胞系_细胞_实验室耗材_仪器试剂_

MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系

【细胞货号】 C0878

"选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做和氧化方面的，而这种培养基中含有剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含剂的培养基。

瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后，将血清放入，MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系待温度升高到56℃后计时，一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清包括不同批次对细胞的影响。【细胞缩写】" MH7A细胞

【细胞名称】 MH7A(类风湿关节炎滑膜成纤维细胞)

【背景资料】 "慢性間接リウマチ患者滑膜細胞をSV40 T antigenにより転換し株化したもの。IL-1betaに反応しIL-6を産生するという。

Rheumatoid fibroblast-like synoviocyte transformed with SV40 T antigen. Respond to IL-1beta. "

【细胞来源】细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系

【代次】 P4

【规格】复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

"细胞冻存及复苏基本知识普及：

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。

除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜DMSO，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。

采用""慢冻快融""的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内-196℃。【细胞数】" 1*10（6）

【生物安全级别】 1

【生物体】人

【组织来源】滑膜

【细胞形态】成纤维细胞样

【细胞特性】贴壁

【细胞活力】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【细胞检测】细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

"细胞常规培养传代流程请严格遵照无菌操作

1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞注意把握消化时间，通常控制在1-2min

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时不建议消化到细胞漂浮去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散

3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

4、注意培养基PH值变化情况，定期换液每周2-3次，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

特别注意：MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养

1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时

2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。【培养条件】" 详见细胞说明书

【传代方法】建议1:2-1:3 两天换液一次

【冻存条件】详见细胞说明书

【主要文献】 "Fujishiro Maki et al. 2012 Apr. Mod Rheumatol 22(2):228-37.,

Seong Ah-Reum et al. 2011 Jul. Biochem. Biophys. Res. Commun. 410(3):581-6.,

Igarashi Hideya et al. 2012 Jan. Immunol. Lett. 141(2):246-53.,

Bader Rebecca A et al. 2011 Feb. Biomacromolecules 12(2):314-20.,

Bader R A et al. 2010 Jul. Cytokine 51(1):35-41.,

Nozawa Kazuhisa et al. 2009. Arthritis Res. Ther. 11(6):R174."

细胞冻存及复苏基本知识普及：

除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。

采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

细胞冻存的步骤

（1）选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。

（2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为5×106～1×107/mL之间。（冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择。

（3）将分装上述细胞悬液于2ml冻存管中，每管0.25ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）

（4）将装好细胞的冻存管放到冻存盒中，-80℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后转到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐。

（5）细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

如何进行细胞复苏：

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀;

3. 离心， 1000rpm，5min;

4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养;

5. 次日更换一次培养液，继续培养。

温馨提醒

1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液;

2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作（戴棉手套），以免冻伤;

3.冻存和复苏用新配制的培养液。

细胞复苏的时候，有些初次实验员将冻存管从液氮中取出后，放在室温下，经常发生冻存管爆炸，该怎么避免出现这种情况吗？其中在拧紧冻存管的时候是否有哪些细节要注意的？

一般常用的方法是取出冻存管后在超净工作台中用酒精棉球擦试管口，再稍拧松盖子，再放37度水浴锅中摇溶，在将细胞转移到装有37度预热过的培养基的试管中，迅速离心，再用培养基洗一遍。C0932 NBLE：新生牛眼晶体上皮细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C0933 NBL-S：人神经母细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

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C0983 NIH3T3：小鼠胚胎细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C0984 NISE-Sacy-12：蓖麻蚕卵细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C0990 NP69-SV40T：永生化鼻咽上皮细胞系，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系C0991 NPA：人甲状腺乳头状癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C0996 NS-1：小鼠骨髓瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C0997 NS2OY：小鼠神经母细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C0999 NSCF：正常人瘢痕成纤维细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1000 NT2/D1：人畸瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1001 NTERA-2：人恶性多发性畸胎瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1003 NUGC3：胃癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1004 NUTU-19：大鼠卵巢癌细胞株，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1005 NW38：人黑色素瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1013 OCM-1：人眼脉络黑色素瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1014 OCM-1A：人低侵袭性脉络膜黑色素素瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1019 OMC-1：人眼脉络膜黑色素瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1021 OSC-19：人舌鳞癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1023 OUMS-23：结肠癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1024 OVAC：人卵巢癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1025 Ovary：人卵巢癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1026 OVCA432：人卵巢癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1028 OVTOKO：人卵巢癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1031 P388：小鼠细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1034 P615：615小鼠乳头状肺腺癌瘤株，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1045 PC14/B：肺癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1046 PC-2：人胰腺癌细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1053 PCK：大黄鱼肾细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1054 PF-382：人T淋巴瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1055 Pfeiffer：人弥漫性大细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1056 PFSK-1：人恶性胚瘤细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1057 PG：人肺巨细胞癌，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1058 PG-4：猫星形脑胶质细胞，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

C1059 PG49：人肺腺癌细胞系，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养的技术支持，让您实验再无烦扰！

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