MH7A滑膜成纤维细胞系_细胞_实验室耗材_仪器试剂_

MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系

【细胞货号】 C0878

"选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做和氧化方面的，而这种培养基中含有剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含剂的培养基。

瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装，MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系在溶解过程中须规则摇晃均匀小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后，将血清放入，待温度升高到56℃后计时，一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清包括不同批次对细胞的影响。【细胞缩写】" MH7A细胞

【细胞名称】 MH7A(类风湿关节炎滑膜成纤维细胞)

【背景资料】 "慢性間接リウマチ患者滑膜細胞をSV40 T antigenにより転換し株化したもの。IL-1betaに反応しIL-6を産生するという。

Rheumatoid fibroblast-like synoviocyte transformed with SV40 T antigen. Respond to IL-1beta. "

【细胞来源】细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系

【代次】 P4

【规格】复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

"细胞冻存及复苏基本知识普及：

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。

除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜DMSO，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。

采用""慢冻快融""的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内-196℃。【细胞数】" 1*10（6）

【生物安全级别】 1

【生物体】人

【组织来源】滑膜

【细胞形态】成纤维细胞样

【细胞特性】贴壁

【细胞活力】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【细胞检测】细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

"细胞常规培养传代流程请严格遵照无菌操作

1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞注意把握消化时间，通常控制在1-2min

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时不建议消化到细胞漂浮去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散

3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

4、注意培养基PH值变化情况，定期换液每周2-3次，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养

1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，原瓶培养基的继续使用时间长不宜超过72小时

2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。【培养条件】" 详见细胞说明书

【传代方法】建议1:2-1:3 两天换液一次

【冻存条件】详见细胞说明书

【主要文献】 "Fujishiro Maki et al. 2012 Apr. Mod Rheumatol 22(2):228-37.,

Seong Ah-Reum et al. 2011 Jul. Biochem. Biophys. Res. Commun. 410(3):581-6.,

Igarashi Hideya et al. 2012 Jan. Immunol. Lett. 141(2):246-53.,

Bader Rebecca A et al. 2011 Feb. Biomacromolecules 12(2):314-20.,

Bader R A et al. 2010 Jul. Cytokine 51(1):35-41.,

Nozawa Kazuhisa et al. 2009. Arthritis Res. Ther. 11(6):R174."

细胞培养相关培养基选购基本指南：

如何选择培养基：经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。为什么这样说呢?如果这种细胞是购自一些细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。

培养基这么多种，MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞系要选择起来也是个头疼的事情。除了部分培养基是公开配方的，或者是专门针对某一种细胞的，如昆虫基本培养基和神经祖细胞基础培养基，但是大部分液体培养基都是配方的，也就是说其中的成分是保密的。那么你只能是检索文献、让供应商推荐，然后用自己的细胞做几次传代培养来选出的培养基。毕竟实践出真知。

怎么样才可以买到好的培养基产品：首先，当然需要找对品牌，其次是找对自己所在区域的品牌代理商，针对自己所养的细胞，咨询供应商该选用哪种的培养基进行培养，这样就可以买到好的而且适合自己的培养基产品。

关于培养基品牌，目前公司所知道的高校实验室有些同学在用Corning系列培养产品，也有同学在用Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)等品牌的产品。

培养基的选择和使用

MEM：成分简单，贴壁细胞。

DMEM：分高糖型和低糖型。

IDMEM：适合细胞密度低，生长困难的细胞。如杂交细胞的筛选，DNA转染后转化细胞的筛选培养。

RPM1640：应用广泛的培养基之一。悬浮细胞培养，主要针对淋巴细胞，也适合其他细胞。

199、109培养基：成分齐全，培养效果较好。

F10培养基：适合小鼠及人类二倍体细胞培养。

F12培养基：适合单细胞分离培养及无血清培养。

McCoy’s5A培养基：特别适合原代细胞及较难培养细胞的生长。

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