菌种保存管是实验室保存菌种的容器,内有25颗表面凹孔小瓷珠用于细菌的吸附和保存,可在保存周期内使用25次(每次1个)。使用过程中,将细菌接种在保存管内,放置于-20℃或-80℃环境中可长期保存(视不同菌种与保存温度,一般可保存3-10年),同时菌种的取用和保存较为便利(取用复苏及保存菌株仅需1分钟)。 | |
由于菌种保存管取用和保存便利,不仅可保存一般细菌,苛刻菌,以及霉菌、酵母菌等真菌也可在低温条件下保存,因此被广泛应用于临床领域(临床药敏试验菌株的保存)、疾控领域(监测分离到的菌株的保存)、菌种保存中心(菌株的日常取用与保存)以及制药企业(阳性对照菌株保存和取用)等领域。 |
细菌在适宜其生长的环境中(培养环境:需氧、厌氧、微需氧,培养温度:35℃或25℃),会在极短时间内(8-18小时)经历由调整期-对数期-稳定期-衰退期)四个生长周期(真菌需要培养7天、酵母菌需要培养三天产生孢子后保存,具体情况需看对数期的时间确定)。 菌种保存的终目的,是能够在以后的时间使用该菌种。要达到这个目的,一般同时结合以下的三方面的措施: | |
1.取生命力旺盛的对数期阶段的菌种,该阶段菌种生命力为顽强,能够更好的耐受保存过程中温度的变化。 | |
2.通过降低温度,使细菌其进入“休眠状态”,保存过程中该菌种处于的代谢活动。 | |
3.降低细菌在降温“休眠过程”和升温“复苏过程”中,温度变化对菌种的伤害。 |
目前较多实验室所常用的甘油保存法的改进方法,可以简述为“甘油小瓷珠保存法”。 | |
产品保存时,将菌种刮取或转移至冻存管中,上下颠倒冻存管,重力作用下,菌种均匀分布于冻存保护液中。将冻存管中的全部冻存液吸取出冻存管。密布凹孔的小瓷珠,扩大了小瓷珠的表面张力,在表面张力作用下,每个小瓷珠的表面仅仅覆盖着一层冻存保护液,而菌种则存在于这层保护液之中。
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产品使用时,从-20/-40/-80冰箱中拿出冻存管,轻轻晃动。由于此时的保存管内已没有聚集的液体,瓷珠在低温下也会很容易相互分离,而不必像传统甘油法保存时需要很长的甘油融化时间。随后,用接种针任取一瓷珠,就可直接在平板上划线接种或置于增菌液中培养。 | |
接种完成后,立即将该保存管置于原有的保存环境中,由于此种方法能够快速的取用菌株,因此,菌种保存管内部温度的波动相当的小。因此,能够极大避免保存温度的大幅波动对的菌种的伤害。
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菌种保存方法的对比 | |||||
所用耗材 | 所用设备 | 综合成本 | 保存的时间 | 保存的时间使用场所 | |
平板法 | 平板、接种针、培养基 | 高压锅、培养箱、低温冰箱、超净台 | 总成本:9元/菌株 | 1-3个月 | 2-8℃、短期保存,需定期传代 |
斜面法 | 离心管、接种针、培养基 | 高压锅、培养箱、低温冰箱、超净台 | 总成本:9元/菌株 | 3-6个月 | 2-8℃、短期保存,需定期传代 |
纸片法1 | 离心管、纸片、培养基 | 高压锅、培养箱、-80℃冰箱、超净台 | 总成本:16.65元/株 | 12-24个月 | -80℃,不适合苛刻菌保存 |
纸片法2 | 安瓿瓶、纸片、培养基、酒精灯 | 超净台、-20℃或-80℃冰箱、 高压灭菌器、水浴锅、 真空干燥箱、干燥器、培养箱 | 总成本:16.65元/株 | 12-24个月 | -20℃、-80℃保存,不适合苛刻菌保存 |
冻干法 | 安瓿瓶、保护剂 | 超净台、高压灭菌锅、 培养箱、冻干机 | 总成本:30元/株 | 10-20年 | 2-8℃、长期保存 |
甘油法 | 冻存管、培养基、接种环 | 超净台、-20℃或-80℃冰箱、培养箱、水浴锅 | 总成本10元/株 | 1-3年 | -20℃、-80℃、液氮保存,中期保存 |
甘油瓷珠法 | 接种针 | 超净台、-20℃或-80℃冰箱、培养箱 | 总成本8.2元/株 | 3-10年 | -20℃、-80℃、液氮保存,中长期保存 |
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菌种复苏方法 | |||||||||||||||||
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