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一）整套试剂及用品
鉴定生化反应的10种试剂（表1）、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶1 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。
二）生化管的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞
（如左图）。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三）单核增生李斯特氏菌生化鉴定盒的详细使用方法
挑取选择性培养基上的可疑菌落接种木糖、鼠李糖发酵管36±1℃培养24－48h，同时接种TSA－YE平板30±1℃培养24－48h,
纯培养物供染色镜检和生化试验.
染色镜检:将上述纯培养物做革兰氏染色并做湿片检查;李斯特氏菌为革兰氏阳性小杆菌,大小为0.4～0.5µm×0.5～2.0µm;用生
理盐水制成菌悬液,在油镜或相差显微镜下观察,该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动.
过氧化氢酶试验：挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上，滴加1滴3%的过氧化氢（H2O2）溶液，李斯特氏菌呈过氧化氢
酶阳性反应。
将上述可疑菌新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中，与1 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成1McFarland (约3.0×108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如右图左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如右图右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如右图），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。
注意：如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1
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产品名称
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结果判定
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培养时间
|
使用说明
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阳性
|
阴性
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|||
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葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、鼠李糖、木糖
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黄色
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紫色
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24h—5d
|
|
|
葡萄糖磷酸盐胨水（MR）
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红色
|
不变色
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96h
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西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加MR试剂2－3滴，立即观察结果。
|
|
葡萄糖磷酸盐胨水（VP）
|
红色
|
不变色
|
48h
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西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。
|
|
七叶苷
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棕黑色
|
不变色
|
24h—5d
|
|
|
SIM培养基
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扩散生长，成伞状
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无扩散生长
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25℃
2—5d
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用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，竖立培育。
|
|
过氧化氢酶试剂
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产生气泡
|
无气泡
|
30秒
|
用接种环挑取新鲜培养物于西林瓶，观察气泡产生。
|
备注：本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四）单核细胞增生李斯特氏菌的主要生化特性及有关菌的区别见表2。（只供参考）
表2 单核细胞增生李斯特氏菌生化性状与有关菌的区别
|
菌种
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溶血反应
|
动力试验
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葡萄糖
|
麦芽糖
|
MR-VP
|
甘露醇
|
鼠李糖
|
木糖
|
七叶苷
|
|
单核细胞增生李斯特氏菌
L.monocytogenes
|
＋
|
+
|
＋
|
＋
|
+/+
|
－
|
+
|
－
|
+
|
|
格氏李斯特氏菌
L.grayi
|
－
|
+
|
＋
|
＋
|
+/+
|
＋
|
_
|
－
|
+
|
|
斯氏李斯特氏菌
L.seeligeri
|
＋
|
+
|
＋
|
＋
|
+/+
|
－
|
－
|
＋
|
+
|
|
威氏李斯特氏菌
L.welshimeri
|
－
|
+
|
＋
|
＋
|
+/+
|
－
|
V
|
＋
|
+
|
|
伊氏李斯特氏菌
L.ivanovii
|
＋
|
+
|
＋
|
＋
|
+/+
|
－
|
－
|
＋
|
+
|
|
英诺克李斯特氏菌
L.innocua
|
－
|
－
|
+
|
+
|
+/+
|
－
|
V
|
－
|
+
|
注: “+” 阳性；“－” 阴性； “V” 反应不定
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