一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的8种试剂(表1)、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管
二)生化管的使用方法
开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如左图)。
所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
注意:生化管,应尽量将塑帽套紧,以免挥发造成假阳性!
三)致泻大肠埃希氏菌生化鉴定盒的详细使用方法
致泻大肠埃希氏菌仅是大肠埃希氏菌中的一小部分。挑取平板分离的可疑的菌落进行革兰氏染色镜检,将疑是致泻大肠埃希氏
菌的新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中,与0.5 McFarland的浊度管比浊,将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL ),用吸管吸取2滴(约0.06mL)菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如右图左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如右图右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如右图),或放置于合适的瓶架中,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。
注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1
产品名称
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结果判定
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培养时间
(小时)
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使用说明
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阳性
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阴性
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三糖铁琼脂
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产酸变黄色
产硫化氢变黑色
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不变色
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24
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用接种针挑取新鲜菌苔穿刺,穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种,西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)后竖立培育。
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蛋白胨水
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红色
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不变色
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24
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后加靛基质试剂2-3滴,立即观察结果。
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尿素
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桃红色
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淡橙红色
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12-24
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生长
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不生长
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24-48
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试验管与对照管均生长为阳性;试验管不生长,对照管生长为阴性。
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赖氨酸脱羧酶
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试验管蓝绿色,
对照管变黄
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试验管与对照管
均变黄
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18-24
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每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支,并加灭菌液体石蜡3-4滴覆盖培养基表面。培养18-24小时,未见阳性结果,继续培养4天,再做最终结果判定。
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半固体琼脂
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扩散生长
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无扩散生长
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24-48
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用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种,竖立培育。
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备注:本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。