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一）整套试剂及用品
鉴定生化反应的10种试剂（表1）、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。
二）生化管的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞（如左图）。
所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
注意：生化管，应尽量将胶塞套紧，以免挥发造成假阳性！（如果发现生化鉴定管的颜色由浅黄色变为深褐色
或黑色即为变质，不能继续使用）
三）沙门氏菌生化鉴定盒的详细使用方法
沙门氏菌为需氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，有动力，有周鞭毛（但有无动力的变种），最适温度为37℃，最适pH为7.2～7.6，
在固体培养基上37℃ 24h菌落可呈中等大小，光滑，圆形，湿润，隆起，在液体培养基内生长均匀浑浊。挑取平板分离的可疑菌
落直接进行三糖铁琼脂和营养琼脂培养，将可疑菌落置于已配备的无菌生理盐水，与0.5 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如右图左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如右图右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如右图），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。
注意：如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1
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产品名称
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结果判定
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培养时间
（小时）
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使用说明
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阳性
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阴性
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|||
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三糖铁琼脂
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产酸变黄色
产硫化氢变黑色
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不变色
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24
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用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）后竖立培育。
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蛋白胨水
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红色
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不变色
|
24
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西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加靛基质试剂2－3滴，立即观察结果。
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尿素
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桃红色
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淡橙红色
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12－24
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生长
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不生长
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24－48
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试验管与对照管均生长为阳性；试验管不生长，对照管生长为阴性。
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|
|
赖氨酸脱羧酶
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试验管蓝绿色，
对照管变黄
|
试验管与对照管均变黄
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18－24
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每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡3－4滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做最终结果判定。
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甘露醇、山梨醇
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黄色
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紫色
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8－24
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β－半乳糖苷（ONPG）
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深黄色
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淡黄色或无色
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12－24
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注:本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四）沙门氏菌生化鉴定特征
自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂在三糖铁琼脂内，肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。
表2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果
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斜面
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底层
|
产气
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硫化氢
|
赖氨酸脱羧酶试验培养基
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可能的菌属和种
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|
—
|
+
|
+（—）
|
+（—）
|
＋
|
可疑沙门氏菌属
|
|
－
|
+
|
+（—）
|
+（—）
|
－
|
可疑沙门氏菌属
|
|
＋
|
+
|
+（—）
|
+（—）
|
＋
|
可疑沙门氏菌属
|
|
＋
|
+
|
+/—
|
+/—
|
－
|
非沙门氏菌属
|
|
注：“+” 阳性；“—” 阴性；“+（—）”多数阳性，少数阴性；“+/—”阳性或阴性。
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表2说明在三糖铁琼脂内斜面产酸，底层产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株可以排除，其它的反应结果均有沙门氏菌
的可能，同时也均有不是沙门氏菌的可能。
在接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白胨水（供靛基质试验）、尿素琼脂（PH7.2）、
培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种，于36±1℃培养18～24小时，必要时可延长至48小时，
按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保留24h，以备必要时复查。
表3 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表
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反应序号
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硫化氢
|
靛基质
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尿素
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赖氨酸脱酸酶
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|
|
A1
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+
|
—
|
—
|
—
|
+
|
|
A2
|
+
|
+
|
—
|
—
|
+
|
|
A3
|
－
|
—
|
－
|
－
|
＋/—
|
反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、和赖氨酸3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2
项异常为非沙门氏菌。
表4 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表
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尿素
|
赖氨酸脱酸酶
|
判 定 结 果
|
|
|
—
|
—
|
—
|
甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）
|
|
—
|
+
|
+
|
沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ（要求符合本群生化特性）
|
|
+
|
—
|
+
|
沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）
|
注：“+”表示阳性；“－”表示阴性。
反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行
判定。
反应序号A3：补做ONPG试验，ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性，甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。
表5 沙门氏菌属各生化群的鉴别(必要时做，本鉴定盒没有提供整套相应的生化管，需另买单盒)
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项目
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I
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II
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III
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IV
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V
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VI
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卫矛醇
|
＋
|
＋
|
－
|
－
|
＋
|
－
|
|
山梨醇
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
＋
|
－
|
|
水杨素
|
－
|
－
|
－
|
＋
|
－
|
－
|
|
ONPG
|
－
|
－
|
＋
|
－
|
＋
|
－
|
|
丙二酸盐
|
－
|
＋
|
＋
|
－
|
－
|
－
|
|
（KCN）
|
－
|
－
|
－
|
＋
|
＋
|
－
|
|
注：“+”表示阳性；“—”表示阴性。
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