一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的8种试剂(表1)、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。
二)生化管的使用方法
开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如左图)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)奈瑟氏菌属细菌生化鉴定盒(已加小牛血清)的详细使用方法
奈瑟氏菌属革兰氏染色阴性,但有保留紫色的倾向,球菌,多数成对,接触面扁平,向两个方向分裂,有时可形成四联状。培养
时湿度必须大于50%,对于淋病奈瑟氏菌和脑膜炎奈瑟氏菌还必须给予5—10%的二氧化碳条件。某些种需要一定的氨基酸作为生长因
子。触酶阳性。
挑取可疑菌落进行革兰氏染色镜检,将疑是奈瑟氏菌属的新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中,与0.5 McFarland的浊度管比浊,将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL ),用吸管吸取2滴(约0.06mL)菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如右图左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如右图右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如图2),或放置于合适的瓶架中,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。
注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1 (均已加小牛血清)
产品名称
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结果判定
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培养时间
(小时)
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使用说明
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阳性
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阴性
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奈葡萄糖
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黄色
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不变色
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24-48
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用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种。
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奈麦芽糖
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同上
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同上
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同上
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奈乳糖
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同上
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同上
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同上
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奈蔗糖
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同上
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同上
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同上
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奈果糖
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同上
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同上
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同上
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奈硝酸盐还原
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深红色
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略带淡粉红色
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18-24
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后滴加硝酸盐还原试剂甲、乙液各2滴,混匀,立即观察结果。
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营养琼脂
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生长
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不生长
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18-24
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用接种环划线接种
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氧化酶试纸
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红色
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不变色
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立即
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用玻棒挑取新鲜培养物于试纸表面,观察菌落颜色。
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备注:本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四)奈瑟氏球菌属内种的生化鉴定特征见表2 (只供参考)
表2 奈瑟氏球菌属内种的生化特性(均已加小牛血清)
名称
试验项目
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淋病
奈瑟氏球菌
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脑膜炎
奈瑟氏球菌
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干燥
奈瑟氏
球菌
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微黄
奈瑟氏
球菌
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浅黄
奈瑟氏球菌
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粘液
奈瑟氏球菌
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奈葡萄糖
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+
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+
|
+
|
+
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-
|
+
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奈麦芽糖
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-
|
+
|
+
|
+
|
-
|
+
|
奈乳糖
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-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
奈蔗糖
|
-
|
-
|
+
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V
|
-
|
+
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奈果糖
|
-
|
-
|
+
|
V
|
-
|
+
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奈硝酸盐(还原)
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-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
+
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氧化酶
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+
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+
|
+
|
+
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+
|
+
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注:“+” 大多数菌株阳性 “—”大多数菌株阴性 “V” 性质不稳定