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一）整套试剂及用品
鉴定生化反应的16种试剂（表1）、5瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、5支灭菌一次性吸管。
鉴定生化反应的16种试剂（表1）、5瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、5支灭菌一次性吸管。
二）生化管的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞（如左图）。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三）弧菌科生化鉴定盒的详细使用方法
弧菌科是无芽胞的革兰氏阴性直的或弯曲的杆菌，氧化酶阳性。大多数的种最适的生长条件需要2—3%氯化钠或以海水做培养
基的基础。通常见于淡水或海水中，偶见于鱼或人体内。
挑取平板分离的可疑菌落进行革兰氏染色镜检，将疑是弧菌科的新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中，与0.5 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如右图左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如右图右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如图2），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。
注意：如如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1
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产品名称
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结果判定
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结果观察
时间（小时）
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使用说明
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阳性
|
阴性
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|||
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1%NaCl葡萄糖产气
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小倒管有气泡
|
小倒管无气泡
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8－24
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使用前先确定小倒管内无气泡。
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1%NaCl 葡萄糖磷酸盐胨水（VP）
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红色
|
不变色
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48
|
西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。
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|
1%NaCl蛋白胨水
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红色
|
不变色
|
24
|
西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加靛基质试剂2－3滴，立即观察结果。
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1%NaCl蔗糖、1%NaCl甘露糖、1%NaCl阿拉伯糖、1%NaCl肌醇
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黄色
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紫色
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8－24
|
|
|
1%NaCl赖氨酸脱羧酶
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试验管蓝绿色，
对照管变黄
|
试验管与对照管均变黄
|
18－24
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每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡3－4滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做最终结果判定。
|
|
1%NaCl精氨酸双水解酶
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试验管蓝绿色，
对照管变黄
|
试验管与对照管均变黄
|
18－24
|
使用方法（同上）。
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|
无盐胨水
|
生长
|
不生长
|
24－48
|
|
|
3%NaCl胨水、6%NaCl胨水、8%NaCl胨水、 10%NaCl胨水
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生长
|
不生长
|
18－24
|
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备注：本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四）肠杆菌科常见属、种的生化特性见表2 （只供参考）
表2 致病性弧菌的鉴别特征（均含1%NaCl）
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试 验 项 目
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霍 乱 弧 菌
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以 态
弧 菌
|
副溶血
性弧菌
|
溶藻性
弧菌
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创 伤
弧 菌
|
河弧菌
|
弗尼斯
弧菌
|
霍乱斯
弧菌
|
|
葡萄糖
产气
|
－
|
－
|
－
|
－
|
－
|
－
|
＋
|
＋
|
|
VP
|
－/+
|
－
|
－
|
+
|
－
|
－
|
－
|
－
|
|
蛋白胨水
|
+/－
|
+/－
|
+/－
|
d
|
+
|
－
|
－/+
|
+
|
|
蔗 糖
|
+
|
－
|
－
|
+
|
－/+
|
+
|
+
|
－
|
|
甘露糖
|
+
|
+
|
+
|
+
|
d
|
+
|
+
|
－
|
|
阿拉伯糖
|
－
|
－
|
+/--
|
－
|
－
|
+
|
+
|
+
|
|
肌 醇
|
－
|
－
|
－
|
－
|
－
|
－
|
d
|
－
|
|
赖氨酸
脱羧酶
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
－
|
－
|
－
|
|
精氨酸
双水解酶
|
－
|
－
|
－
|
－
|
－
|
+
|
+
|
－
|
|
无盐胨水
|
+
|
+
|
－
|
－
|
－
|
－
|
－
|
－
|
|
3%NaCl
胨水
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
|
6%NaCl
胨水
|
－/(+)
|
－/(+)
|
+
|
+
|
+
|
+
|
+
|
(+)
|
|
8%NaCl
胨水
|
－
|
－
|
+
|
+
|
－
|
+/－
|
+/－
|
－
|
|
10%NaCl
胨水
|
－
|
－
|
－
|
+
|
－
|
d
|
--/(+)
|
－
|
注：“+” 多数阳性 “—” 少数阳性 “d” 结果不定
“（+）”弱阳性 “+/－” 多数阳性，少数阴性 “－/+” 多数阴性，少数阳性
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