一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的12种试剂(表1)、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。
二)生化管的使用方法
开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如左图)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)出血性大肠杆菌O157:H7生化鉴定盒的详细使用方法
出血性大肠杆菌O157:H7为革兰氏阴性杆菌,需氧或兼性厌氧,有周鞭毛,并有菌毛,不产生芽孢的杆菌。发酵乳糖,不发酵或迟
缓发酵山梨醇;氧化酶阴性;MUG阴性。
从可疑肉汤培养物转接营养琼脂分离培养,将疑是肠杆菌科的新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中,与0.5 McFarland的浊度管比浊,将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL ), 37℃培养18-24h,用吸管吸取2滴(约0.06mL)菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如右图左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如右图右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如右图),或放置于合适的瓶架中,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
产品名称
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结果判定
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培养时间
(小时)
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使用说明
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阳性
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阴性
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山梨醇
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黄色
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紫色
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8-24
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纤维二糖
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棉子糖
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蛋白胨水
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红色
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不变色
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24
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后加靛基质试剂2-3滴,立即观察结果。
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西蒙氏枸橼酸盐
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生长
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不生长
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24-48
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。
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鸟、赖氨酸脱羧酶
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试验管蓝绿色,
对照管变黄
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试验管与对照管均变黄
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18-24
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每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支,并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18-24小时,未见阳性结果,继续培养4天,再做最终结果判定。
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半固体琼脂
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扩散生长
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无扩散生长
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24—48
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用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种,竖立培育。
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三糖铁琼脂
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产酸变黄色,
产硫化氢变黑色
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不变色
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24
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)用接种针挑取新鲜菌苔穿刺,穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。
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葡萄糖磷酸盐胨水
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MR: 红色
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不变色
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96
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后加MR试剂2-3滴,立即观察结果。
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VP: 红色
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不变色
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48
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西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液,混匀,再培养10-20分钟观察结果。
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备注:本鉴定盒是按照环凯产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。