沙丁胺醇检测

一、概要
     沙丁胺醇(Salbutamol ,SAL) 属于β-2兴奋剂的一种。β-2兴奋剂中最常作为促生长剂使用的是克伦特罗(Clenbuterol ,CL)，但随着对CL 检测力度的加大，非法使用者开始转向其他替代品。由于SAL与CL 的促生长作用相差不大，其在动物体内的消除时间比克伦特罗短，毒性较弱。因此，SAL 就成为CL之后最主要的替代品。将SAL 作为饲料添加剂使用，能显著促进动物生长、增加饲料转化率和瘦肉率，长期超量使用，则会在动物组织中蓄积，人食用了这种动物产品后会引发中毒。
     本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被沙丁胺醇抗原，样品残留的SAL和微孔条上预包被的抗原共同竞争抗沙丁胺醇抗体，加入酶标二抗后，经TMB底物显色，样品吸光度值与其残留物SAL呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中SAL的含量。
三、适用范围
 可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样品中沙丁胺醇的残留量。
四、交叉反应率
沙丁胺醇 ……………………………………… 
多巴酚丁胺 …………………………………………小于1%
盐酸多巴胺?…………………………………………小于1%
克仑特罗 ………………………………………小于1%
五、检测步骤
测定前应须知：
 1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。
2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。
 3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
 4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
 操作步骤：
 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
 2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
 3、洗涤工作液在使用前也需回温。
 4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。
 5  加标准品/样品：加标准品/样品50l/孔到对应的微孔中，然后加入沙丁胺醇抗试剂50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
 6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250l/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
 7、加酶标物：加入沙丁胺醇酶标物100l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。
 8、显色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。
 9、测定：加入终止液50l/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.2ppb
样品检测限：
动物组织…………………………………0.6ppb
尿样样品…………………………………0.6ppb
饲料样品…………………………………………20ppb
回收率：
组织样品………………………………………80±10%
尿样样品………………………………………80±10%
饲料样品…………………………………………80±10%
精密度：试剂盒的变异系数均小于10%
七、注意事项
 1、室温低于20℃或试剂及样品没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
 2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
 3、每加一种试剂前需将其摇匀。
 4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
 5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
 6、储存条件:保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
 7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
 8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min。反之，则减短反应时间。
 9、该试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
八、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。