盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒

一、概要
    克伦特罗（Clenbuterol）属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。HPLC或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法，但是其前处理步骤费用昂贵；而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿，血清，肌肉，肝脏及饲料中的CLE。
   本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物克伦特罗负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。
三、适用范围
 可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液、血清等样本中克伦特罗的残留量。
四、交叉反应率
克伦特罗 ………………………………………………
特普他林 ……………………………………………小于1%
非诺特罗 ……………………………………………小于1%
马布特罗 ……………………………………………小于1%
西马特罗 …………………………………………小于1%
溴布特罗 ……………………………………………小于1%
塞曼特罗 ……………………………………………小于1%
五、操作步骤
 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
 2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
 3、洗涤工作液在使用前也需回温。
 4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
 5、加标准品/样本：加标准品/样本20l/孔到对应的微孔中，再加入克伦特罗酶标物50l/孔，再加入克伦特罗抗试剂80ul/孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反30min
 6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300l/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
 7、显色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。
 8、测定：加入终止液50l/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.1ppb
样本检测限：
组织样品………………………………………0.3ppb
尿液或血清样品………………………………0.1ppb
饲料样品……………………………………5ppb
回收率：
组织样品………………………………………80±10%
尿液或血清样品………………………………80±10%
饲料样品…………………………………80±10%
精密度：试剂盒的变异系数均小于10%
七、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件：保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长），但不得超过40min。反之，则减短反应时间。
9、该试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
八、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。