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【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA法检测尿样和组织等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行，样本中的克伦特罗和微孔条上预包被偶联抗原竞争标记有辣根过氧化酶的抗莱克多巴胺抗体，通过洗涤后，用TMB底物显色，样品中的莱克多巴胺含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.1ppb
检测时间： 45min
样本检测下限：
尿 样 ………………………………… 0.1ppb
组 织（处理法一）…………………… 0.4ppb
肉样本（处理法二）…………………… 0.1ppb
肝样本（处理法二）…………………… 0.2ppb
饲 料 …… …………………………… 1ppb
交叉反应率：
莱克多巴胺（Ractopamine）………………
克伦特罗（Clenbuterol）………………… <0.1%
沙丁胺醇（Salbutamol ）………………… <0.1%
多巴酚丁胺（dobutamine）……………… <0.1%
样本回收率：
尿 样 ……………………… 95%±10%
组 织 ……………………… 85%±15%
饲 料 ……………………… 85%±15%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）
2、 （Clenbuterol标准溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、 酶标记抗体工作液 10ml………………绿色帽
4、 底物A液 7ml ……………………白色帽
5、 底物B液 7ml ……………………黑色帽
6、 终 止 液 7ml ……………………黄色帽
7、 20X浓缩洗涤液40 ml ………………透明帽
【 所用仪器、试剂】
具备的仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管
微量移液器：单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl
试 剂： 乙腈、甲醇、正己烷、无水硫酸钠
【样本前处理步骤】
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
（a）尿样本的处理方法
取20µl清亮尿样直接测定（如果尿样浑浊一定要过滤或离心10min，4000r/min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。
样本稀释倍数：1
（b）组织样本的处理方法一
1、 称2±0.05g组织，加入6ml去离子水，充分振荡2min，室温4000r/min以上离心10min。
2、 取20µl上清液进行分析。
样本稀释倍数：4
（c） 组织样本（肌肉和肝脏）处理方法二
1、 称取均匀后的组织样本2±0.05g ，加入8ml乙腈溶液，充分振荡2min。4000r/min以上，15℃离心10min；
2、 取上清液5ml，在56℃条件下氮气或空气流吹至完全干燥；
肉样本：
加入1ml 去离子水混合振荡30s，取20µl用于分析。
肉样本稀释倍数：1
肝样本：
加入2ml正己烷振荡溶解，再加入1ml 去离子水混合振荡30s，4000r/min以上，15℃离心5min，去除上层；取50µl下层 与50µl去离子水混匀；取20µl用于分析。
肝样本稀释倍数：2
（d）饲料样本
1. 称1.0±0.05g研碎的饲料样品，加入10ml甲醇，再加入5g无水硫酸钠，放振荡器上振荡2min；15℃ 4000r/min以上离心10min；
2. 吸出离心后的上清液1ml，于56℃氮气吹干，用1 ml 去离子水溶解干燥的残留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上离心5min。
3. 取20µl下层进行分析。
样本稀释倍数：10
【酶标免疫分析程序
测定前应须知：
1、 使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。
2、 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
操作步骤：
1、 将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温（20-25℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷冻。
3、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、 加标准品/样本20µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记抗体80µl/孔，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀，25℃环境中反应30min。
5、 小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用去离子水250µl/孔充分洗涤4-5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6、 显色：每孔加入底物A液50µl，再加底物B液50µl，轻轻振荡混匀25℃环境避光显色15min。
7、 测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处 （建议用双波长450/630nm，检测在5min内读完数据）测定每孔OD值。
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