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【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯霉素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物氯霉素的含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.05ppb
检测时间： 75min
样本定量检测下限：
肠 衣………………………………………………0.1ppb
蜂 蜜………………………………………………0.1ppb
牛 奶………………………………………………0.05ppb
尿液、血清…………………………………………0.1ppb
组织、肝脏……………………………………… 0.025ppb
饲 料………………………………………………0.15ppb
样本回收率：
组织、肝脏………………………………………80%±10%
蜂蜜、肠衣………………………………………70%±10%
牛奶、饲料………………………………………85%±15%
尿液、血清………………………………………70%±10%
交叉反应率
氯霉素………………………………………………
甲砜霉素…………………………………………… < 0.1%
氟甲砜霉素…………………………………………< 0.1%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）
2、 标准液X6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb
3、 酶标记物 12ml……………………红色帽
4、 抗体工作液 7ml…………………… 绿色帽
5、 底物 A 液 7ml…………………… 白色帽
6、 底物 B 液 7 ml…………………… 黑色帽
7、 终 止 液 7 ml…………………… 黄色帽
8、 20X浓缩洗涤液 40ml………………透明帽
9、 2X浓缩复溶液 50ml………………透明帽
【所用仪器、试剂】
具备的仪器：微孔板酶标仪、氮气吹干装置、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g ）
微量移液器：单道 20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl
试 剂：乙酸乙酯、乙腈、正己烷、去离子水、亚硝基铁、硫酸锌、葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)、醋酸钠、醋酸
【样本前处理步骤】
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、
禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。
（b）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染，干扰实验结果。
样本前处理需配制：
配液1、C液（牛奶样本使用）：
0.36M 亚硝基铁（Na2Fe(CN)5•NO•2H2O）10.7g 亚硝 基铁加去离子水100ml溶解。
配液2、D液（牛奶样本使用）：
1M硫酸锌（ZnSO4•7H2O）28.8g硫酸锌加去离子水100ml溶解。
配液3、 pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液（尿样本使用）：称2.4g醋酸钠和1.2ml醋酸加去离子水500ml溶解混合。
配液4、乙腈-水溶液 V乙腈：VH2O＝84：16
配液5、 将2X浓缩复溶液用去离子水按1：1稀释。(1份浓缩复溶掖+1份去离子水，用于抗体的稀释和样本提取后的复溶)。
（a）组织、肝脏样本前处理方法
1、 用均质器均质组织样本；
2、 称3±0.05g样本于离心管中，先加入3ml去离子水充分混匀再加入6ml乙酸乙酯，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min；
3、 取出4ml上层液体在氮气流50-60℃水浴中干燥；
4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释后的复溶液强烈振荡混合30s，室温4000r/min以上离心5min。
5、 取50 µl下层相用于分析。
样本稀释倍数：0.5
（b）血清血浆
1、 取1ml血清或血浆至试管中，加2ml乙酸乙酯振荡1min；
2、 静置使水相与相分层或室温4000r/min离心5min；
3、 移取上层的乙酸乙酯至另一试管中，用氮气流50℃水浴中干燥；
4、 残留物用1 ml稀释后的复溶液溶解，混合30s；
5、 取50µl用于分析。
样本稀释倍数：1
（c） 尿液
1、 移取2ml尿液到离心管中，加pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液0.5ml混合；
2、 加40µl葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)到稀释的尿液中，在37℃水解至少2小时（或过夜）；
3、 该溶液恢复至室温后加入8ml乙酸乙酯混合1min；
4、 室温4000r/min离心10min，取出4ml上层液体在氮气下50～60℃干燥；
5、 用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，混合30s；
6、 取50µl 用于分析。
样本稀释倍数：1
（d）蜂蜜
1、 取2±0.05 g蜂蜜，放入离心管中，用4ml去离子水溶解；
2、 加入4ml乙酸乙酯上下振荡5min；
3、 室温4000r/min以上离心10min；
4、 移取2ml上层清澈液到另一离心管中，50-60℃氮气流下干燥；
5、 用0.5ml稀释后的复溶液溶解，混合30s；
6、 取50 µl用于分析。
样本稀释倍数：0.5 检测下限：0.025ppb
定量下限：0.1 ppb
注：我们推荐0.1 ppb为阳性样本的cut off值。
（e）肠衣
1、 用均质器均质样本注：干样本需剪碎（长度不超5mm）后再均质，湿样本需用去离子水漂洗20min以上(去除表面的盐份)，沥干后再进行均质。
2、 称1±0.05g均质后的样本于离心管中，加入10ml乙酸乙酯，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min。
3、 取出5ml上层液体（相当于0.5g的样本）在氮气流下50-60℃干燥。
4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加0.5ml稀释后的复溶液强烈振荡混合30s，室温4000r/min以上，离心5min。
5、 去上层相，取下层50 µl用于分析。
样本稀释倍数：1
（f）牛奶和奶粉
牛奶样本处理方法一
1、 牛奶样本，10℃4000r/min以上离心10min，吸除上层脂肪；
2、 取5ml去除脂肪奶样至离心管中，加入150µlC液出现沉淀，短暂振荡后加入150µlD液混合；
3、 15℃4000r/min以上，离心10min，移取上层液；
4、 用稀释后的复溶液以等体积稀释上层液，混合30s；
5、 取50µl用于分析。
注：如果离心后仍然浑浊，再重复沉淀过程。
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