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NADH氧化酶(NOX)测试盒 货到付款

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品牌: 上海酶科
产品货号: YX-C-A004
产品规格: 50管/48样;100管/96样
单价: 460.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 10000 盒
发货期限: 自买家付款之日起 2 天内发货
所在地: 上海
有效期至: 长期有效
最后更新: 2020-01-15 09:52
浏览次数: 744
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明
 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

NOXEC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。

测定原理:

NOX能够将NADH氧化为NADNADH的氧化 2,6 二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的 DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂二:液体 20mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 1.5mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂四:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 5mL 蒸馏水,现配现用。

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

① 准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

② 将匀浆 600g4℃离心 5min

③ 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11100g4℃离心10min

④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的 NOX(此步可选做)。

⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超声3s,间隔10秒,重复30次),用于NOX活性测定。

血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

1)试剂四于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min

2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、200μL试剂四和40μL试剂五,混匀,记录600nm20s时吸光值A11min20s 后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2

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