金黄色葡萄球菌

三、检验方法  1.直接接种法

①样品制备    按常规方法制备样品稀释液（推荐稀释液为无菌生理盐水，不可使用磷酸盐缓冲液），根据样品中金黄色葡萄球菌数量推测选择2-3个连续稀释度备用。

②接种 将测试片置于水平台面，揭开上层薄膜，吸1mL样品稀释液滴加于培养层，缓慢盖上上层薄膜，将匀液板有凹槽部分对准样品稀释液区域轻放于上层薄膜上，手指用力按压匀液板使稀释液于压环内均匀扩散。每个稀释度2个重复。

③培养 接种后的测试片叠放（不多于15片）于自封口袋中（不封口），36℃±1℃培养24h±2h。测试片放于平整处培养（可在培养箱中放一小块纸板），不可直接放于铁丝架上培养，容易使凝胶挤压变形。

④计数 培养结束后取出测试片，蓝绿色（不论颜色深浅）为金黄色葡萄球菌，选择金黄色葡萄球菌菌数为15cfu/片-150cfu/片的测试片进行计数。废弃物需经121℃高压灭菌20分钟后处理。

⑤生化鉴定 揭开测试片上层薄膜，无菌挑取可疑阳性菌落接种于5mL BHI培养基中36℃±1℃培养18h-24h。血浆凝固酶试验方法同GB 4789.10。

2.划线接种法 ①水化测试片 将测试片置于水平台面，揭开上层薄膜，吸1mL无菌生理盐水滴加于培养层，缓慢盖上上层薄膜，将匀液板有凹槽部分对准稀释液区域轻放于上层薄膜上，手指用力按压匀液板使稀释液于压环内均匀扩散。放置20分钟使凝胶完全凝固。

②接种 揭开上层薄膜，接种环挑取金黄色葡萄球菌增菌液在上层塑料薄膜与培养层水化培养区相对部分划线（连续之字形划线），将上层薄膜盖在水化好的培养区。

培养、判读、生化鉴定同前