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禽流感H5亚型实时荧光RT-PCR试剂盒(免提)供应

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品牌: 大有泰莱
起订: 1 盒
供货总量:
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 北京
有效期至: 长期有效
最后更新: 2018-04-25 09:44
浏览次数: 495
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

Taqman探针一步法实时荧光RT-PCR--------免提取

编号:KA.PCR008.02


规格48T

介绍:禽流感(Avian influenza)是由A型流感病毒引起的一种人与动物共患病,不仅引起禽类以呼吸系统疾病、产蛋下降乃至急性致死和高死亡率等为特征的烈性传染病,而且可导致人的感染和死亡,严重威胁人类健康。禽流感病毒(Avian influenza virus ,AIV)显著的生物学特征之一是亚型众多,变异频繁,按病原体类型的不同,可分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类。世界卫生组织(OIE)将其列为必须通报疾病。我国2008年修订的《一、二、三类动物疫病病种明录》将其列为一类动物疫病。

用途:该试剂盒用于对AIV H5亚型进行检测,有助于对AIV H5亚型的实验室诊断、监测和流行病调查。

原理:本试剂盒采用一步法实时荧光反转录聚合酶链式反应(One-Step Real Time RT-PCR) ,结合Taqman技术,对特异核酸进行定性或定量检测。

试剂盒的组成

试剂名称

数量

样本处理液

1mL ×1

AIV H5反应液

550μL×1

AIV H5

40μL×1

AIV H5引物探针

120μL×1

无核酸水

1000μL×1

AIV H5阴性对照

1000μL×1

AIV H5阳性对照

150μL×1

保存期及贮藏条件:本产品-20避光可保存12个月。

样品收集,操作和储存

1. 选择发病早期,病毒含量比较高的咽拭子、泄殖腔拭子、血液等样本,无菌采样并立即送检。

2. 样品短期可在4冷藏保存,较长时间保存应在--20或者-70,并且避免反复冻融。

检测步骤

1.样本处理

取咽拭子、泄殖腔拭子上清液、血清、血浆等样本80μL0.5mlEP管中,加入20μL样本处理液混匀备检。

备注:组织样本建议采用商品化的核酸提取试剂盒提取核酸,然后再进行后续检测。

2.扩增试剂的准备

将样品数+1份阴性对照+1份阳性对照设为N,计算试剂所需量,反应体系配制见下表

试剂名称

N份用量(20μL 体系

AIV H5反应液

10μL×N+1

AIV H5

0.5μL×N+1

AIV H5引物探针

1.8μL×N+1

无核酸水

5.7μL×N+1

将各试剂按照表中用量加入无菌离心管中,充分混匀,短暂离心后在PCR反应管中分别加入18μL混合液。

3.加样

将制备好的样本,阴性对照,阳性对照各取2μL分别加入对应反应管中,加完后盖紧PCR反应管盖,置于PCR仪上。

4.荧光PCR扩增与信号收集

循环数

温度(

时间

数据收集位点

1

45

15min

-

1

95

2min

 

5

95

10s

-

 

45

30s

-

 

72

1min

-

40

95

15s

-

 

60

1min

数据收集

 

 

 

 

 

 注:报告基团选FAM,淬灭基团选NONE

 结果成立原则

阳性对照:CT值<30并有明显的扩增曲线。

阴性对照:无CT值或者CT>37,线性为直线或者轻微斜线,无明显扩增曲线。

以上要求需同时满足,否则本次实验无效,需要重新进行。

 结果判定

CT

样本检测结果

<30并有明显的扩增曲线

阳性,样本中检测出AIV H5亚型

30-37

可疑,需重复检测。若第二次检测CT值仍为30-37并有明显扩增曲线则判定为阳性,否则为阴性。

>37并无扩增曲线

阴性,样本中未检测出AIV H5亚型

注意事项

1.反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制,整个实验过程严格控制污染。

2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区模板提取区扩增区。严禁器材和试剂倒流。

3.反复冻融试剂将减低检测灵敏度,本试剂盒应在5次内用完.

4.-20保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化,液体融化后需彻底混匀,2000 rpm离心15 s ,使用后立即放回-20

5.RNA提取过程中,避免RNA酶污染,尽量缩短操作时间。

6.注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。

7.PCR反应管避免气泡存在,管盖需盖紧。


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